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PROTAC药物

PROTAC的优势：



体外试验：

蛋白质印迹

PROTACs下调靶标蛋白质的水平


ELISA


ELISA测定ARV-771处理16 h对细胞c-MYC的抑制水平。


IHC

Panc-1细胞中PRTC通透性的鉴定

PRTC诱导内源性CREPT蛋白的泛素化和蛋白酶体依赖性降解


流式细胞术

采用碘化丙啶(PI)/Annexin-V染色结合流式细胞术检测细胞凋亡



细胞毒性

PROTAC对细胞毒性的影响


体内分析







示例


DCAF15 E3连接酶衍生的PROTAC的在体外和体内降解BRD4的设计和表征。


(A) PROTACs设计方案。(B)用所示浓度的DP1处理SU-DHL-4细胞16 h后，BET蛋白和ACTIN的免疫印迹实验结果。在每个通道计算蛋白质降解活性水平相对于DMSO对照的百分比。(C)用20 μM DP1处理SU-DHL-4细胞，按设定的时间孵育后，BRD4和ACTIN的免疫印迹实验结果。(D)左图:在SU-DHL-4细胞中，用20 μM的配体JQ1和E7820预处理4小时后，再用20 μM的DP1处理14小时后，BRD4和ACTIN的免疫印迹实验结果。右图:在SU-DHL-4细胞中，Carfilzomib (0.2 μM)或MLN4924 (1 μM)预处理4 h后，再经20 μM DP1处理14 h后，BRD4和ACTIN的免疫印迹实验结果。(E)克隆12和亲代细胞用所示浓度的DP1处理24小时后，BRD4和ACTIN的免疫印迹实验结果。(F)用DP1处理48 h的SU-DHL-4细胞的细胞活力分析，比较其组分配体JQ1、E7820和DP1(R) (n = 3)。(G)用JQ1、E7820、DP1(R)和DP1处理SU-DHL-4细胞24小时，免疫印迹实验分析BRD4、c-MYC、裂解PARP、Caspase 3和ACTIN。(H)溶媒对照和DP1 (100 mg/kg)处理小鼠12天的肿瘤体积，n = 8。(I)溶媒对照和DP1治疗小鼠的肿瘤重量。(J)溶媒对照和DP1处理小鼠的肿瘤裂解物中的 BRD4, c-MYC，和ACTIN的免疫印迹结果。



参考文献

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