体外试验:
1. 溶瘤病毒体外培养平台(溶瘤病毒表达及复制效率检测)
2. 溶瘤病毒体外细胞毒性的验证
3.溶瘤病毒的体外诱导和表达，以及细胞因子(IL2, g-IF等)的鉴定。
OVH诱导的IFNs分泌进而上调肿瘤细胞的PD-L1表达
(A) OVH感染的治疗方案及PD-L1分析。(B) PD-L1在OVH感染(GFP+)和非感染(GFP−)Hepa1-6细胞中的表达(MOI = 5)。如图为Hepa1-6细胞和MC38细胞的代表性直方图。(C)在不同感染细胞系中PD-L1的平均荧光强度 MFI的定量。(D)用PBS处理或OVH感染细胞的处理的MC38细胞或Hepa1-6细胞的培养上清经过uv灭活其中PD-L1呈现上调(MOI = 5)。
体内检测:
1. 一种检测溶瘤病毒活性的小鼠模型
2. 治疗后溶瘤病毒诱导的细胞因子(IL2, g-IFNdeng)体内诱导/表达的鉴定
3.鉴定在溶瘤病毒治疗后对体内免疫细胞(CD4、CD8、NK等)的诱导/表达
OVH-aMPD-1增强效应T细胞功能
(A)治疗方案。将携带Hepa1-6肿瘤的小鼠瘤内注射(PBS)、OVH或OVH- ampd -1，病毒注射后第10天收集肿瘤，流式细胞术分析：圈出CD45+细胞总数，分析从注射肿瘤(B)和远端转移肿瘤(C)中分离出的肿瘤浸润CD4+T和CD8+T细胞的百分比。PBS或病毒所注射的肿瘤和远端转移肿瘤其中浸润肿瘤的CD4+和CD8+T细胞表面CD69和ICOS的表达情况。F，肿瘤以及远端转移肿瘤，在瘤内注射两剂OVH或OVH- ampd -1(每剂1 × 107 PFU)或载体7天后，实施CD8+T细胞标记物(CD8α)和CD155的免疫组化分析。
参考文献
Lin, Chaolong et al. “Intratumoral Delivery of a PD-1-Blocking scFv Encoded in Oncolytic HSV-1 Promotes Antitumor Immunity and Synergizes with TIGIT Blockade.” Cancer immunology research vol. 8,5 (2020): 632-647. doi:10.1158/2326-6066.CIR-19-0628
