在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡早期，细胞膜中的磷脂酰丝氨酸（PS）由脂膜内侧翻向外侧。

AnnexinV是一种Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸（PS）有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞的胞膜结合。

碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。

因此将Annexin V与PI匹配使用，通过流式细胞仪检测可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

示例

流式细胞仪检测 Annexin V/PI双染细胞凋亡法

右下象限代表Annexin V-FITC染色细胞（早期凋亡细胞），右上象限代表PI和Annexin V-FITC双染色细胞（晚期凋亡/坏死细胞）。凋亡细胞表示为Annexin V单阳性细胞加Annexin V/ PI双阳性细胞的百分比。O-GlcNAc修饰保护细胞免受乙二醛引起的人视网膜微血管内皮细胞（HREC）ROS诱导的损伤（A）。用OGT siRNA转染HREC并用（200μM）PUGNAc处理，乙二醛培养24小时后，用Annexin V-FITC和PI染色细胞，FACS分析(B) 。HREC细胞的早期细胞凋亡定量分析通过流式细胞术测定。虽然单独使用乙二醛导致细胞凋亡增加（P<0.005 vs. NG），但乙二醛和PUGNAc的联合使用，凋亡细胞数量比单独使用乙二醛观察到的更少（##P<0.001 VS 乙二醛）。蛋白质的O-GlcNAc修饰的下调作用，显著增加了HREC细胞的凋亡率

参考文献

Liu GD, Xu C, Feng L, Wang F. The augmentation of O-GlcNAcylation reduces glyoxal-induced cell injury by attenuating oxidative stress in human retinal microvascular endothelial cells. Int J Mol Med. 2015;36(4):1019-1027. doi:10.3892/ijmm.2015.2319