采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以使抗体也可以是抗原。

在这种测定方法中有三种必要的试剂：

1. 固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）；

2. 酶标记的抗原或抗体（标记物）；

3. 酶作用的底物（显色剂）。

测定时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成偶联物（标记物）,此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。

其所生成的颜色深浅与待测的抗原（抗体）含量相关，这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可用分光光度计（酶标仪）加以测定。其方法简单、方便迅速、特异性强。

分类

• 双抗夹心法

• 间接法

• 竞争法

• 双位点一步法

• 捕获法测IgM抗体

• 应用亲和素和生物素的ELISA

技术特点

灵敏度高

ELISA的灵敏度来自作为报告基团的酶。酶是一种有机催化剂，很少量的酶即可诱导大量的催化反应，产生可共观察的显色反应现象，因此ELISA体系也被称为酶放大体系。ELISA实现了在细胞或亚细胞水平上示踪抗原或抗体的所在部位，或在微克，甚至纳克水平上对其进行定量。

特异性强

ELISA检测的特异性来自抗体或抗原的选择性。抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗体的抗原结合位点之间。由于两者在化学结构和空间构型上呈互补关系，所以抗原抗体反应具有高度的特异性。