介绍
这类模型是用编辑小鼠基因诱导肿瘤生成。 该模型可在肿瘤发生的不同阶段测试潜在的治疗药物。
优势
使用的是免疫健全小鼠
可以在组织发育的特定时间点激活相关的致癌基因
细胞介导免疫反应高
限制
在时间、充分的肿瘤发展和再现肿瘤内异质性的能力方面面临挑战
抗体介导反应弱
改良肿瘤的组织学与原始人类肿瘤不同
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示例
cre - loxp控制的慢病毒载体，即Tomo慢病毒载体，能够在成年小鼠大脑中以细胞类型特异性的方式诱导一个或多个癌基因的表达。
(A) pTomo H-RasV12慢病毒载体(LV)示意图。 填充片段RFP保持Flag H-RasV12的翻译处于“关闭”状态。 Cre重组酶对填充序列的切除导致Flag H-RasV12的表达。 (B) Cre重组酶诱导H-RasV12表达的免疫细胞化学。 HeLa细胞被Tomo H-RasV12 LVs感染(下)或不(上)表达cres的LVs感染。 固定后，用指示抗体对细胞进行染色。 (C) Western blot显示Cre重组酶诱导的H-RasV12标记表达。 用含有(2、4通道)或不含有(1、3通道)表达crev的Tomo mock lv(1、2通道)或Tomo H-RasV12 lv(3、4通道)感染HeLa细胞，并对细胞裂解物进行western blotting处理。 b-肌动蛋白检测作为加载控制。 (D) GFAP-Cre小鼠GFAP+细胞特异性表达的Cre重组酶共聚焦图像。 8周大的GFAP-Cre小鼠的大脑部分被指示抗体染色。 合并后的图像显示在右侧面板中。 (E)共聚焦图像显示H-RasV12在GFAP+细胞中的表达。 将Tomo H-RasV12 LVs注入GFAP-Cre小鼠皮层7 d后，处死固定小鼠。 用指示的抗体对部分大脑进行染色。 合并后的图像显示在右侧面板中。 标尺，40毫米。(F)成年小鼠大脑矢状位注射LVs位置示意图。 蓝色箭头表示注射lv的位置(1:皮层(CTX)， 2:室下区(SVZ)， 3:海马体(HP))。 OB,嗅球; LV,侧脑室。 (G) Tomo H-RasV12 lv成功注射到三个不同的位置。 将Tomo HRasV12 LVs注射到GFAP-Cre小鼠的皮质、海马和心室下区后7 d拍摄共聚焦图像。 GFP信号(绿色)表示感染了Tomo H-RasV12 LVs的细胞。 用DAPI合并的图像显示在右边的面板中。
H-Ras和AKT联合激活GFAP-Cre小鼠诱发脑瘤
(A) GFAP-Cre小鼠肿瘤形成的代表性图像。 右海马区注射Tomo H-RasV12 LVs的GFAP-Cre小鼠在注射93 d后出现头部增大(黑色箭头)。 比例尺，5毫米。(B)显示大脑大体外观的照片，显示大脑中有一个巨大的病变。 白色箭头表示不规则的大脑表面。 比例尺，3毫米。(C) h&e染色切片(40毫米)的代表图像。 深色区域表示肿瘤细胞密度增加。 比例尺，1.5 mm。(D)截面(40 mm)的代表性共焦图像。 GFP+细胞遍布整个肿瘤。 鳞片，1.5 mm。(E) H&E染色显示胶质瘤的特征，包括细胞密度增加(左上图)，假乳突化(右上图，白色箭头)，密集细胞区坏死(左下图，箭头)和血管周围浸润(右下图，虚线箭头)。 比例尺，50毫米。(F)共聚焦显微镜分析的肿瘤切片(40毫米)。 左图白色箭头显示GFP+肿瘤细胞侵入正常组织(用N表示)。右图显示DAPI合并图像(蓝色)。 比例尺，100毫米。
参考文献
Marumoto, Tomotoshi; Tashiro, Ayumu; Friedmann-Morvinski, Dinorah; Scadeng, Miriam; Soda, Yasushi; Gage, Fred H; Verma, Inder M (2009). Development of a novel mouse glioma model using lentiviral vectors. , 15(1), 110–116. doi:10.1038/nm.1863
